天麻LAMP鑒定試劑盒免費(fèi)代測常見問題與解決方法:

陽性對照、待測樣本均無條帶。
1)、PCR反應(yīng)體系或反應(yīng)條件不合適。
2）、PCR試劑保存不當(dāng)失去活性。
3）、引物設(shè)計(jì)問題。
解決方法：
1）使用梯度PCR摸索PCR反應(yīng)條件。
2）2× PCR Mix應(yīng)保存于-20℃，使用時避免反復(fù)凍融。若使用頻繁，可在4℃短時間存放。
3）嘗試重新設(shè)計(jì)引物進(jìn)行檢查。

陽性對照有目的條帶，待測樣本無條帶或條帶弱。
1、不當(dāng)儲存或長期儲存引起試劑活性喪失。
2、加入組織裂解液過量。
3、樣本裂解混合液保存不當(dāng)或保存時間過久，DNA基因組已經(jīng)降解。
4、模板加入量不適合。
5、PCR循環(huán)數(shù)不足。
解決方法：
1、使用新鮮的試劑。
2、增大反應(yīng)體系，或減少裂解液的用量。
3、裂解混合液液可在4℃保存2-3天，盡量使用新制備的裂解液混合液進(jìn)行PCR。
4、在反應(yīng)體系10-20%范圍內(nèi)優(yōu)化模板加入量。反應(yīng)效性能較差時，可以降模板濃度調(diào)節(jié)到低于10%的范圍。
5、適當(dāng)增加PCR的循環(huán)數(shù)，推薦在35-40循環(huán)為佳。因?yàn)槟０鍙?fù)雜，一般PCR反應(yīng)要比用純化的 DNA模板多5-10個循環(huán)為佳。

非特異性擴(kuò)增

1、PCR退火溫度太低，循環(huán)數(shù)、引物濃度或模板濃度太高。
2、PCR引物錯配。
3、配制PCR反應(yīng)體系時溫度太高或配制完成后放置時間太久。
解決方法：
1、增加PCR退火溫度，降低PCR循環(huán)數(shù)、引物濃度或模板濃度。
2、重新設(shè)計(jì)PCR引物。
3、PCR反應(yīng)體系的配制在低溫下進(jìn)行，配制完成后盡快進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)。

陰性對照出現(xiàn)目的條帶

1、操作工具或試劑污染。
2、樣本間交叉污染。
解決方法：
1、實(shí)驗(yàn)所有試劑或器材均應(yīng)高壓滅菌。操作時應(yīng)小心輕柔，防止將靶序列吸入加樣槍內(nèi)或?yàn)R出離心管外。

2、每個取樣器只對一個樣本使用；或取完一個樣本后，將取樣器刃口浸入2%的次**鈉溶液中，反復(fù)涮洗，然后用干凈的紙巾擦干殘液。

詳見說明