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技術(shù)文獻(xiàn)

人膽囊上皮細(xì)胞永生化細(xì)胞細(xì)胞傳代步驟

文字:[大][中][小] 2020-5-27    瀏覽次數(shù):482    

膽囊,是位于右方肋骨下肝臟后方的梨形囊袋構(gòu)造,有濃縮和儲存膽汁之作用。膽囊壁由粘膜、肌層和外膜三層組成。 膽囊內(nèi)面以粘膜覆蓋,有發(fā)達(dá)的皺襞。膽囊收縮排空時,皺襞高大而分支;膽囊充盈時,皺襞減少變矮。粘膜上皮為單層柱狀,內(nèi)分散分部著少量杯狀細(xì)胞。膽囊粘膜細(xì)胞具有典型的吸收型細(xì)胞的特征,具有較強(qiáng)的吸收和濃縮功能,上皮細(xì)胞吸收膽汁中的水和無機(jī)鹽,經(jīng)細(xì)胞側(cè)面的質(zhì)膜轉(zhuǎn)運(yùn)至上皮細(xì)胞間隙內(nèi),吸收的水和無機(jī)鹽通過基膜進(jìn)入固有層的血管和淋巴管內(nèi)。同時,膽囊粘膜亦有分泌功能,分泌粘液。 該細(xì)胞通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶SV40基因。


人膽囊上皮細(xì)胞永生化細(xì)胞細(xì)胞傳代步驟:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

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