牛血清的質(zhì)量控制標準中有一項重要的指標是病毒的檢測。比較常見的易感
染奶牛和肉牛的病毒如 DNA 病毒：牛腺病毒 3 型（Bobine Adenovirus Type 3，
BAV-3），主要引起牛的呼吸道和腸道疾病，其主要特征為肺炎、腸炎、結(jié)膜炎
和多發(fā)性關(guān)節(jié)炎，是犢牛死亡的重要原因之一。其易感和潛伏性給畜牧業(yè)及其國
際貿(mào)易帶來嚴重的經(jīng)濟損失，同時，給細胞培養(yǎng)以及相關(guān)基礎(chǔ)研究帶來一定的問
題。因此，病毒的快速檢測是控制牛血清質(zhì)量的前提，除了傳統(tǒng)的培養(yǎng)傳代觀察
細胞病變，血清學診斷技術(shù)外，我們在這里引入熒光定量 PCR 的方法，來快速
檢測血清樣品中是否污染有 BAV-3。本產(chǎn)品是根據(jù)BAV-3核酸序列的保守區(qū)pol
蛋白酶設(shè)計引物，定制的一種檢測 BAV-3 的熒光定量 PCR 試劑盒。它具有下列
特點：
1. 即開即用，用戶只需要提供 DNA 模板即可使用。
2. 快捷，整個 PCR 過程只要一小時。
3. 靈敏度達達 100copies/reactlon 水平。
4. 熒光 PCR mix 中含第二代飽和型熒光染料，效果好于 SYBR Green I。
5. 密封體系，極大降低了假陽性。
6. 本產(chǎn)品跟各種熒光 PCR 儀器兼容。

運輸及保存:

使用方法:

一、樣品 DNA 的制備（本試劑盒不含所需試劑）
用自備試劑抽提病毒樣品 DNA。注意：可以選用本公司的病毒 DNAout 或柱
式病毒 DNAout。
二、熒光 PCR 反應(yīng)（25 uL 體系） 
1. 配制標準品，用 DNA 稀釋液將 BAV-3 標準品（1.27X10E11 拷貝/uL）稀
釋到不同的濃度，每個濃度差 10 倍，共 8-10 個梯度。此標準品系列將用于
制作標準曲線。
2. 設(shè)置 PCR 反應(yīng)：在 PCR 管中加入下列成分（N 取決于上步的稀釋梯度由客
戶自己決定）：
成分 樣品管
標準坪梯度
（共 8-10 管）
陰性對照
2×熒光 PCR Mix 12.5 uL 12.5 uL 每管 12.5 uL
待檢測樣品 DNA（自備） 1-5 uL 無 無
標準品(8-10 個梯度) 無 N uL 每管 無
BAV-3 專一性引物一 2 uL 2 uL 2 uL
BAV-3 專一性引物二 2 uL 2 uL 2 uL
補超純水到 25 uL 25 uL 25 uL
3. 上機進行熒光定量 PCR。熒光定量 PCR 反應(yīng)參數(shù)如下（以 ABI7500 熒光定
量 PCR 儀為參考）：
過程 溫度 時間
預(yù)變性 94℃ 2 min
兩步式 PCR 反應(yīng)
（40 個循環(huán)）
94℃ 30 s
60℃ 90 s
4. 根據(jù) 8-10 管標準品的 Ct 值（x 軸）和濃度（y 軸）描出標準曲線，再根據(jù)
待測樣品的 Ct 值技術(shù)按出樣品的濃度。