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技術文獻

抗凝山羊血(無菌 pet瓶裝)制備方法

文字:[大][中][小] 2021-8-18    瀏覽次數:388    
抗凝山羊血(無菌 pet瓶裝)制備方法:
此法用于制備間接法抗抗體。因抗原為可溶性,故多需加佐劑。
(1)淋巴結注射法
1)選擇體重2~3Kg的健康雄性家兔( 2只以上),編號;
2)在家兔兩后腳掌共注射活卡介苗,50mg(約0.6mL.每只足庶部皮下0.1mL,皮內0.2mL)。7~10d后,鼠或國窩處淋巴結腫大如黃豆或蠶豆大小;
3)用二指固定腫大之淋巴結,兩側淋巴結各注射加有完全佐劑的抗原o.5mL,共1mL。事先將抗原稀釋為 5~10mg/ml,在免疫前一日加入青、鏈霉素,使青、鏈霉素的濃度分別為1000U/mL和1000mg/mL。4℃,次日取出與佐劑混合成乳劑。許多單位用兩個注射器分別吸取佐劑與抗原,中間用細膠管連接,相互推進若干次,達到乳化目的;

4)10~14d后,于兩側淋巴結各注射加有完全佐劑的抗原0.25~0.5mL(這一次也可以省略);

5)7d后,于兩側淋巴結各注射加有不完全佐劑的抗原0.25~0.5mL;
6)試血:第三次免疫后7~10d,耳靜脈取少量血,分離血清,用雙擴散法,中間孔加抗原(1mg/mL),周圍孔加不同稀釋度的待檢抗血清,37℃、 24h,觀察結果,效價在1︰16以上,或者中間孔加抗血清,周圍孔加不同稀釋倍數的抗原。效價達4000倍以上即可應用;
7)放血:效價合格后即可放血。放血前停食12h。動物仰臥固定,頸部剪毛消毒,切開皮膚lOcm,找到頸動脈,將頸動脈和迷走神經剝離。選擇血管中段,用兩止血鉗夾住(約 5cm),切開,放血(2500g重家兔可放血lOOmL);

8)分離血清:血液放于大試管、平皿或三角瓶中,凝固后,用鉑耳或無菌滴管沿邊緣剝離,先故37122h,再放4℃,使血清充分析出。離心沉淀,鑒定合格,冰箱保存備用。

生長激素釋放多肽(GHRP)ELISA試劑盒
生長激素結合蛋白(GHBP)ELISA試劑盒
生長激素(HGH)ELISA試劑盒
生長激素(GH)ELISA試劑盒
生長分化因子-9(GDF-9)ELISA試劑盒
生長分化因子9(GDF-9)ELISA試劑盒
生長分化因子3(GDF3/UNQ222/PRO248)ELISA試劑盒
生長分化因子2(GDF2)ELISA試劑盒
生長分化因子15(GDF-15)ELISA試劑盒
生長分化因子15(GDF15)ELISA試劑盒
生存素(survivin)ELISA試劑盒
腎小球組織糖基化終末產物(GTE-AGE)ELISA試劑盒
腎損傷分子1(Kim-1)ELISA試劑盒
腎素(Renin)ELISA試劑盒
腎上腺髓質素前體(Pro-ADM)ELISA試劑盒
腎上腺髓質素(ADM)ELISA試劑盒
腎上腺素能a1A受體(ADRA1A)ELISA試劑盒
腎上腺素(EPI)ELISA試劑盒
腎上腺皮質抗體(ACA)ELISA試劑盒
腎病蛋白(nephrin)ELISA試劑盒
腎胺酶(RNLS/MAO-C)ELISA試劑盒


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